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SILAC蛋白質組分析技術
實驗流程??
應用領域
技術優(yōu)勢
細胞培養(yǎng)氨基酸穩(wěn)定同位素標記（Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture, SILAC），是2002年丹麥Mann實驗室對AACT技術作進一步改進而獲得，并開始應用于定量蛋白質組學研究，為**、系統(tǒng)地定性和定量分析復雜哺乳動物細胞蛋白質組提供有效的解決方案。?
- 疾病標志物篩選
- 作用機制研究
- 藥物作用靶點研究
- 特殊功能蛋白質篩選
- 多個樣本混合后同時進行分離、酶切和鑒定，后續(xù)實驗對樣品的影響是一致的，減少了實驗操作和儀器設備引入的定量誤差；
- 體內標記技術，標記不受裂解液成分影響，效果穩(wěn)定，標記效率高達99%；
- 可以對在DMEM、DMEM-F12、1640三種培養(yǎng)基中培養(yǎng)的多種細胞進行標記；
- 靈敏度高，樣本量要求少。
技術原理
?SILAC的基本原理是分別用天然同位素（輕型）或穩(wěn)定同位素（重型）標記的必需氨基酸取代細胞培養(yǎng)基中相應氨基酸，細胞經>6個倍增周期后，穩(wěn)定同位素標記的氨基酸**摻入到細胞新合成的蛋白質中取代了原有氨基酸。不同標記細胞的裂解蛋白按細胞數或蛋白量等比例混合，經分離、純化后進行質譜鑒定。
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