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SILAC蛋白質組分析技術

實驗流程??
應用領域
技術優(yōu)勢
細胞培養(yǎng)氨基酸穩(wěn)定同位素標記(Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture, SILAC),是2002年丹麥Mann實驗室對AACT技術作進一步改進而獲得,并開始應用于定量蛋白質組學研究,為**、系統(tǒng)地定性和定量分析復雜哺乳動物細胞蛋白質組提供有效的解決方案。?

  • 疾病標志物篩選            
  • 作用機制研究
  • 藥物作用靶點研究        
  • 特殊功能蛋白質篩選

  • 多個樣本混合后同時進行分離、酶切和鑒定,后續(xù)實驗對樣品的影響是一致的,減少了實驗操作和儀器設備引入的定量誤差;
  • 體內標記技術,標記不受裂解液成分影響,效果穩(wěn)定,標記效率高達99%;
  • 可以對在DMEM、DMEM-F12、1640三種培養(yǎng)基中培養(yǎng)的多種細胞進行標記;
  • 靈敏度高,樣本量要求少。

技術原理

?SILAC的基本原理是分別用天然同位素(輕型)或穩(wěn)定同位素(重型)標記的必需氨基酸取代細胞培養(yǎng)基中相應氨基酸,細胞經>6個倍增周期后,穩(wěn)定同位素標記的氨基酸**摻入到細胞新合成的蛋白質中取代了原有氨基酸。不同標記細胞的裂解蛋白按細胞數或蛋白量等比例混合,經分離、純化后進行質譜鑒定。

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